ʻO ka mālama ʻana no ka polyacrylamide gel electrophoresis

· polyacrylamideʻO ka gel pono e ka acrylamide monomer, polymerization mea hoʻomaka, catalyst, a me ka pono o ka paʻakai a me ka hui pū.

· acrylamidea me BIS (N, N '- methylene double acrylamide) ka monomer form gel matrix.

· ammonium persulfate hoʻomaka adhesive polymerization kaʻina. Pono ka hoʻokumu ʻana o ke kāpili i ka 10% ammonium persulfate solution i hoʻomākaukau ʻia i ka wai. ʻO ka hapa nui o ka ʻike i hōʻike i ka pono o ka hoʻohana ikaika. Eia nō naʻe, hiki ke waiho ʻia ka hopena 10% ma 4 ℃ no kekahi mau pule me ka nalowale ʻole o ka hana. E hoʻonui i ka 10 ml a hoʻolei i ka wā e hui ʻole ai ke kāpili.

Manaʻo kōkua: ʻO ka pākēneka oacrylamideʻaʻole i like ka hoʻopaʻa ʻana i ke kolu a me ke kāpili protein. Inā hoʻohana i ka acrylamide premade: BIS solution, e hōʻoia e kiʻi i ka ʻōmole kūpono.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) he mea hoʻoheheʻe, i loko o ka ʻōmole ʻeleʻele, waiho ʻia i loko o ka friji. E hoʻohui ma mua o ka ninini ʻana i ke kāpili.

· polyacrylamide electrophoresis hoʻohana aniani i electrophoresis pono e holoi ma mua a ma hope o kēlā me kēia manawa. Ma hope o ka electrophoresis, holoi me ka pulupulu palupalu a me ka lole i loko o ka wai kopa wela, holoi me ka wai distilled a kū a maloʻo.

· hiki i ka makū a me ka lepo ke hana me ka polymer puhaka. Ma mua o ka electrophoresis, e hoʻomaʻemaʻe i ka pā aniani me ka mea hoʻomaʻemaʻe aniani a holoi iā ia me kahi pulupulu palupalu. Holoi me ka wai a maloʻo loa me kahi holoi pepa. ʻO ka holoi ʻana me 70% ethanol ma mua o ka holoi ʻana me ka pepa e kōkua i ka hoʻomaʻemaʻe a me ka wikiwiki o ka maloʻo. Hoʻohui pū i nā laʻana o ka acrylamide: BIS, wai, hoʻonā pale, ammonium persulfate, TEMED. E lulu maikaʻi a ninini koke.

ʻAʻole pono e hoʻopau i ka polyacrylamide ma mua o ka polymerization. (Hoʻokomo ʻia ʻo Acrylamide i loko o kahi ʻūhā no ka wehe ʻana i nā ʻōhū no ka mea ke kāohi nei ka oxygen i ka polymerization.)

ʻO nā ʻōlelo aʻoaʻo laʻana o ka lae glue point.

· hoʻokomo i kahi ʻāpana pepa ʻeleʻele ma ka pahu lalo, ʻeleʻele ʻeleʻele e hana i kekahi puka laʻana e ʻike pono ai.
· hoʻopiha ʻia ka pahu paʻa paʻa, ma luna o ka colloid.
· inā he kukui ka lihi, e hoʻā i nā kukui, e hoʻomālamalama i ka colloid. E huki i ka hāpana i loko o ka pipette.
· ka hoʻohana ʻana i ka mea hana paipu ʻakomi.
· ma 10-200 mu 1 wai neʻe wahi hiki ke hoʻohana i ka hapa nui o nā helu ma ka hāpana. No nā lua liʻiliʻi liʻiliʻi (emi iho ma mua o 10μ1), ʻoi aku ka maʻalahi o ke poʻo pipette lōʻihi i hoʻohana ʻia no ka sequencing glue.

· hoʻokomo wale ʻia ka paipu i loko o ka hāpana, hoʻohu ʻana i ka wai e neʻe mālie. Hiki ke ʻike ʻia ka laʻana me ka glycerin, a ʻo ka pahū wikiwiki ʻana e huki i nā ʻōhū ea i loko o ke poʻo pipette.

· nā laʻana ma hope o ka inha ʻana i ke poʻo pipetting, e hoʻoneʻe mālie i ke poʻo wai ma ka lihi o ka paipu a i ʻole ka holoi ʻana i ka pepa omo wai i ke poʻo ma waho o nā kulu. E akahele mai omo i ka hāpana.

E kau i ka hāpana i loko o ka lua hāpana

· ka mea paipu no ka mālama ʻana i kahi kaomi iki, e hoʻoneʻe iki i nā laʻana i ke poʻo wai.
· ke poʻo paipu i hoʻokomo ʻia i loko o ka pahu, ʻoi aku ka kiʻekiʻe ma mua o nā puka kiko, e mālama i ke kaomi maikaʻi. Hiki ke hoʻokomo i ka piko o ka pipette i loko o kahi lua liʻiliʻi.
· lohi a paʻa i nā laʻana i waho. Hoʻonoho ʻia ka piko o ka pipette ma luna o ka lua kiko, a e pohō ka hāpana i loko o ka lua. E poʻo ka hāpana e hoʻopiha i ka lua hāpana ma mua o ke kaomi ʻana i loko.
· i ka manawa o ka hāʻule hope loa o ka laʻana me ke poʻo wai, e neʻe ka wai i ka wāwae ʻelua, e hoʻokiʻekiʻe mālie i ka neʻe wai, e neʻe i waho o ka pale.

Pehea e hana ai i ka laʻana o ke kāpili kūpaʻa?

· nā puka laʻana lāʻau lāʻau i hana ʻia ma waena o ʻelua ʻāpana aniani. I loko o ke kāpili lahilahi loa, ʻaʻole hiki ke hoʻokomo ʻia ke poʻo pipette ma waena o nā papa aniani ʻelua. E nānā i ka glycerin! E kau i ke poʻo pipette ma luna o ka lua hāpana a e pohō ka hāpana i loko o ka lua.
· kiko laʻana ma mua, e hōʻoia e kau i ka vertical kiko o polypropylene acyl gel hāpana lua ua holoi maʻemaʻe. Holoi i ka acrylamide unpolymerized a me ka wai e ʻike ʻia ma lalo o ka lua hāpana. Hiki i ka wai ke hoʻoemi i ka lua hāpana. E hoʻohana i kahi syringe 25ml a i ʻole 50ml a me kahi nila 18-gauge. E ninini i ka pahu electrophoresis a holoi pono i ka lua hāpana.
· hiki ke paʻakikī ke ʻike i ka lua hāpana, akā ma ka like, maʻalahi ke koena. Inā nui nā puka, hiki ke hoʻāʻo ʻia ka pahu hāpana me ka bromophenol blue.